분자미생물학 실험 - mini preparation(plasmid DNA를 소량 분리하는 방법) 실험

Plasmid 분리 실험 & Agarose gel을 이용한 plasmid 전기영동1. PurposeE.coli를 배양해 플라스미드를 분리하고, 분리한 플라스미드를 직접 만든 Agarose gel을 이용하여 전기 영동한다.2. Introduction● Plasmid DNA 분리의 원리 주로 mini-prep이라고 부르는 이 방법은 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법이다. 가장 보편적으로 사용되는 방법인 Alkali lysis method이다. 기본적인 원리는 그림에서 보듯이 세균의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA 만을 분리하는 것이다. 이 때 중요한

분리하고 collection tube의 용액을 버린다.11. Washing bufferB 700㎕를 넣고 1분 원심분리하고 collection tube의 용액을 버린다.11. 빈 collection tube에 column을 끼우고 12,000rpm에서 1분 동안 원심분리한다.12. column을 E-tube에 옮기고 50㎕의 elution buffer를 넣은 후 1분간 incubation한다.13. 12,000rpm에서 1분간 원심분리한다.4.Discussion이번 실험에 사용된 mini-prep이라고 부르는 방법은 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법이다. 가장 보편적으로 사용되는 방법인 Alkali lysis method이다. 기

실험 10. Plasmid 분리 실험 & Agarose gel을 이용한 plasmid 전기영동실험날짜 : 2009년 5월 27일 & 6월 3일1. PurposeE.coli를 배양해 플라스미드를 분리하고, 분리한 플라스미드를 직접 만든 Agarose gel을 이용하여 전기 영동한다.2. Introduction● Plasmid DNA 분리의 원리 주로 mini-prep이라고 부르는 이 방법은 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법이다. 가장 보편적으로 사용되는 방법인 Alkali lysis method이다. 기본적인 원리는 그림에서 보듯이 세균의 cell wall과 cell membrane을 부

DNA sub-cloning Sub cloning단계 1. 원하는 유전자 분리 (2010. 11. 15)- Restriction enzyme 처리- Gel electrophoresis - Gel purification2. Cloning할 유전자를 cloning vector(plasmid)에 삽입(2010. 11. 16)- Ligation- Competent cell 만들기- Heat-shock을 이용한 transformation- LB agar plate에 spreading3. 유전자가 삽입된 DNA를 세포 내로 주입(2010. 11. 17)- Transformation 확인- LB broth에 transformant를 multiplication 4. 올바른 clone의 증폭(2010. 11. 18)- Plasmid mini-prep실험1 Digestion of DNA with Restriction Enzyme◈ Purpose Re

Plasmid DNAPlasmid isolation- Cell culture - Cell harvest- Cell lysis- Purify plasmid DNAMethod1) Boling method- Lysozyme, Triton(detergent), 열 처리2) Lithium method- Triton X-100/LiCl과 phenol/chloroform 3) Alkaline lysis method- NaOH, SDS, potassium acetate 등Plasmid IsolationAlkaline lysis method- 세포의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA만을 분리하는 방법- Chromosomal DNA 와 plasmid의 고유한 형태 구조 차이를 이용 !; Chromosomal DNA – 상대적으로 size가 크고, double heilxPlasmid – size가 작고, supercoiled 형태 -> pH