[단위조작실험] BCA를 이용한 단백질정량분석
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- 목차
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- 목 적
- 실 험 이 론
- 준 비 사 항
- 실 험 방법 및 과정
- 실 험 결 과
- 고 찰
- 본문내용
-
단백질 용액에 Cu2+ 이온을 반응시킨 후,
Bicinchoninate(BCA)가 Cu+ 이온과 복합체를
형성하여 자색으로 발색하는 반응을 이용한 방법.
562 nm 에서의 흡광도를 측정.
- Standard curve로부터 농도를 결정.
장 점 단 점
반응 시약이 안정적 이다.
단일 시약을 사용하므로 방법이
간단 하다.
일반적인 버퍼물질에 간섭이 적다.
반응이 느리다.
실온에서 반응이 완전히 수행
되지 않는다. (항온조 사용)
농축된 단백질 샘플은 희석이 종종 필요 하다.
특정 파장의 빛이 화학물질에 의해 흡수되는 정도, 즉
흡광도(absorbance)를 측정하는 측정기
일반적으로 빛이 물체에 닿으면 빛은 물체에 흡수될 수도
있고 통과 할 수도 있다. 이 때 흡수되는 빛이 그 농도에
따라 다르기 때문에 이러한 빛의흡수현상을 이용하여
시료용액 중 빛을 흡수하는 물질의 양을 정량하는 것이다
미지시료(lacase)의 흡광도 : 0.7163(1/20 희석)
y = 0.0391χ + 0.0251
을 통해 농도χ를 구하면 17.68μg/ml (1/20 희석)
- 원래 단백질 시료의 농도
20 X 17.68 = 353.6 μg/ml
- 참고문헌
-
- http:// wiki.science.ru.nl
- http://sciencefair.math.iit.edu/techniques/
spectrophotometer/
http://www.absoluteastronomy.com/topics/Beer-
Lambert_law
http:// www1.encyber.com
http://oksure.org/archives/2314
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