cycle 후반부에는 반응 시간을 조금씩 늘려가는 것도 좋은 방법의 하나이며 마지막 cycle에서는 약10분 정도 시간을 충분히 주어 효소의 활성이 충분히 발휘되도록 한다.
PCR을 민감도가 뛰어난 실험이기 때문에 아주 적은 양의 DNA가 오염되더라도 실험에 큰 영향을 끼치니 주의해야 한다.
1) HLA형의 결정
2) 법의학: 특정인의 유전자 검출
3) 암유전자의 검출: ras, myc, fos 등
4) 유전성 질병의 진단: Progressive muscular dystrophy (Duchenne type)등
5) 감염성 질병의 진단: Streptococcus, Salmonella, Hepatitis virus 등
PCR(Polymerase Chain Reaction)1.Title-PCR of Co dehydrogenase gene & 16S rDNA sequence2.Date-2007년 10월 2일(火), 2007년 10월 4일(木)3.Object & Introduction*PCR PCR(유전자증폭기술)은 중합 효소 연쇄 반응법이라고도 하며, 인위적으로 유전자를 증폭하는 방법이다. PCR은 DNA 중합효소를 이용해 DNA단편의 여러 복제본을 한꺼번에 만드는 방법으로, 아주 적은 양의 DNA만을 갖고서도 단시간에 특정 부위의 유전자를 기하급수적으로 증폭할 수 있다. 미국 세터스(Cetus)社에 의해 개발돼
PCR (in situ PCR) PCR은 원하는 DNA를 대량으로 증폭시키는 방법이고, in situ hybridization (ISH)은 세포나 조직에 존재하는 극미량의 DNA 및 RNA를 찾아내거나 원하는 유전자들의 위치를 확인할 수 있는 방법이다. IS-PCR은 이 두 가지 방법의 장점을 혼합하여 응용한 방법으로서 PCR의 sensitivity와 ISH의 specificity를 모두 갖춘 방법이다. 실험원리는 일반적인 PCR 방법과 같으나 slide glass 등의 사용에 적합한 IS-PCR용 기구가 필요하며 사용하는 기구에 따라 반응시키는 방법
효소 연쇄반응 중합효소연쇄반응 (PCR)은 임상검체내에 매우 작은 수로 존재하는 미생물의 DNA또는 RNA를 증폭하여 검출하는 기법으로서 감염증의 진단을 위하여 필수적인 검사방법으로 인정받고 있다. PCR의 기본 원리는 목적하는 유전자의 양 끝에 해당하는 1쌍의 primer를 유전자에 접합시킨 후 그 유전자를 증폭시키는 효소인 polymerase로 두 primer 사이를 합성하고 합성된 DNA는 다시 같은 두 primer의 반복되는 접합과 증폭으로 기하급수적으로 원하는 유전
PCR 산물의 크기 1 kb마다 1분 정도의 시간을 배당하면 충분히 반응이 일어난다. Cycle이 계속되면서 효소 활성이 감소할 수 있고 DNA 산물은 점점 많이 존재하게 되므로 cycle 후반부에는 반응시간을 조금씩 늘려가는 것도 좋은 방법의 하나이며 마지막 cycle 에는 약 10분 정도 시간을 충분히 주어서 효소의 활성이 충분히 발휘되도록 한다. 2. 실험재료 및 실험방법Materials‣Lysis buffer-50mM KCl -10mM Tris (pH 8.3)-2.5mM MgCl2 -0.45% NP-40(IGEPAL)-0.45 tween-20 -0.05% Gelatin‣10
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