[졸업]미생물분과

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하고 싶은 말: *학부졸업논문입니다.

목차: ·서론

·재료 및 방법
1. 실험재료
2. cDNA Making
3. TA cloning
4. DNA purification
5. PCR & 전기영동
6. Competitive PCR

·결과
1. dNTP와 MgCl2의 농도 변화에 따른 PCR product의 차이
2. Template와 cycle 수의 변화에 따른 PCR product의 차이
3. Competitive PCR에 의한 target의 정량

·고찰
1.Competitive PCR
2. Real Time PCR

·요약

본문내용: ·서론
1983년 Kary Mullis에 의해 고안된 Polymerase Chain Reaction(PCR)은 80년대 제한효소의 발견에 의한 Gene cloning 이후 생명공학 분야의 연구에 있어서 획기적인 계기가 되었다. PCR이 소개된 이후 지속적인 연구를 통해 현재 그 방법은 매우 다양해졌고 응용 범위 또한 매우 넓어졌다. PCR은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복, 합성하여 시험관내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법으로서 짧은 시간 내에 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA를 합성할 수 있다. 이러한 장점 때문에 미량의 DNA는 PCR에 의해 수 시간 내에 105∼108배까지 증폭되어질 수 있으며 genomic DNA와 같은 큰 DNA로부터 원하는 DNA 부분만을 선택적으로 증폭시킬 수 있다. 증폭된 DNA는 일반적으로 agarose gel 전기영동 방법에 의해 쉽게 확인할 수 있게 된다. 또한 PCR에 쓰이는 template는 DNA뿐만 아니라 RNA 모두 이용할 수 있으므로, genome DNA, cDNA등 원하는 DNA 분자는 PCR에 의해 손쉽게 증폭이 가능하다. 이러한 많은 장점 때문에 PCR은 여러 분야에서 응용되고 있는데, 예를 들면 세포로부터 어느 한 특정 DNA fragment를 cloning하는 것은 물론이고 바이러스 감염의 초기 식별에 사용되기도 한다. 법의학에서도 폭넓게 응용되는데, 그 이유는 미량의 DNA라도 분석이 가능하며, finger printing에 의해 범인 색출에 큰 도움이 되기 때문이다.

참고문헌: Michael A. Innis, David H. Gelfand, John J. Sninsky. PCR applications : protocols for functional genomics/ edited by San Diego: Academic Press, 1999.

Jiang Gu. In situ polymerase chain reaction and related technology. Natick, MA : Boston : Eaton Pub. ; Birkh user, 1995.

Bernd Kochanowski and Udo Reischl. Totowa, N.J. Quantitative PCR protocols.: Humana Press, c1999.

Wang. A.M., Doyle, M.V. and Mark, D.F. (1989) Quantitation of mRNA by the polymerase chain reaction. Proc. Natl. Acad. Sci USA 86, 9717-9721.

Diaco, R. (1995) Practical considerations for the design of quantitative PCR assays. PCR Strategies Chapter 7, 84-108.

Gause, W.C. and Admovicz, J. (1995) Use of PCR to quantitate relative differences in gene expression. PCR PRIMER, 293-311.

Ferre, F. (1992) Quantitative or semi-quantitative PCR: Reality versus myth. PCR Methods Applic. 2, 1-9.

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