단백질은 SDS와 polyacrylamide 전기영동(SDS-PAGE)→ 분자량에 따른 분리
PCR 산물의 확인
정제한 plasmid의 확인
DNA 단편의 정제 → gel elution
단편해석(base sequencing)
Southern & Northern blot 해석
Agarose gel로부터 DNA fragment를 자른다.
2. 1.5ml microcentrifuge tube 에 gel slice를 넣어 무게를 재고 QG buffer를 gel 무게의 3배만큼 첨가.
3. 50도에서 10min incubate, incubation 동안 매 2~3분마다 vortexing 하면서 mix
4. Sample에 gel volume의 동령으로 iso-propanol 첨가 & mix
5. QiAquick column에 sample를 넣고 centrifuge
6. Collection tube의 여과액을 버리고 column를 다시 collection tube에 끼운다.
7. Column에 PE buffer 0.75ml 를 첨가하고 column을 2~5분 세워 놓은 후 centrifuge.
8. Collection tube의 여과액을 버리고 한번 더 centrifuge.
9. Column을 1.5ml microcentrifuge tube 속에 넣는다.
10. Column의 membrane 중앙에 EB buffer 40ml 첨가. 1min 세워 놓은 후 centrifuge.
11. 전기영동으로 확인
Gel의 재료는 agarose나 polyacrylamide가 흔히 쓰이며 분리하고자 하는 DNA의 크기에 따라서선택한다. Agarose gel은 100bp이상 20kb까지의 DNA를 분리하는데 사용되며 polyacrylamide gel은 1kb 이하 크기의 DNA를 분리하는데 쓰인다.(2) 완충액 - DNA gel 전기영동에는 세가지 완충액이 흔히 쓰인다. 보통 농축액인 저장용액(stock solution)으로 만들어 놓고 사용한다. Tris-acetate buffer는 resolution은좋으
Gel의 재료는 agarose나 polyacrylamide가 흔히 쓰이며 분리하고자 하는 DNA의 크기에 따라서선택한다. Agarose gel은 100bp이상 20kb까지의 DNA를 분리하는데 사용되며 polyacrylamide gel은 1kb 이하 크기의 DNA를 분리하는데 쓰인다.(2) 완충액 - DNA gel 전기영동에는 세가지 완충액이 흔히 쓰인다. 보통 농축액인 저장용액(stock solution)으로 만들어 놓고 사용한다. Tris-acetate buffer는 resolution은좋으
agarose gel에서 DNA분리 효과가 감소된다. 2kb보다 큰 DNA조각들의 분리를 최대로 하기 위해서는 agarose gel에 5V/cm이상의 전압을 부하시켜서는 안 된다.cf. 전기영동 tank와 gel은 동일한 전기영동 완충액을 사용해야한다. 이온강도 또는 PH에 약간의 차이만 있어도 DNA 조각의 이동속도에 크게 영향을 주기 때문이다.● agarose gel electrophoresis를 할 때 다음의 역할은?1) agarose : 겔화 힘이 센 중성 다당류의 하나로 생체 물질을 분리하는 여과재로 단백질이나 효소
agarose gel에서 DNA분리 효과가 감소된다. 2kb보다 큰 DNA조각들의 분리를 최대로 하기 위해서는 agarose gel에 5V/cm이상의 전압을 부하시켜서는 안 된다.cf. 전기영동 tank와 gel은 동일한 전기영동 완충액을 사용해야한다. 이온강도 또는 PH에 약간의 차이만 있어도 DNA 조각의 이동속도에 크게 영향을 주기 때문이다.● agarose gel electrophoresis를 할 때 다음의 역할은?1) agarose : 겔화 힘이 센 중성 다당류의 하나로 생체 물질을 분리하는 여과재로 단백질이나 효소
Agarose gel에서 electrophoresis한 모습, 전기영동에 대한 principle은 첫 날 했던 것과 동일하다.) 에서 보는 바와 같이 BAFF upstream (sense) & downstream (antisense)는 왼쪽, β-actin은 오른쪽인데 β-actin쪽은 다른 조와 마찬가지로 뚜렷하게 단백질 band를 드러냈고 뿐만 아니라 다른 조와 비교해서 그 윤곽이 더욱 선명했다. 하지만 BAFF는 모든 조에서 electrophoresis 통해 agarose gel 그 어디에도 나타나지 않았다.4. Overall Observations4.1. Result그날 그날의 실험에서 매일 result를 얻
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