액체크로마토그래피 실험 - HPLC에 의한 롯데칠성음료 칸타타(아메리카노), 광동제약 비타500 분석 실험
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서론: 이동상으로 액체를 이용하는 크로마토그래피를 액체크로마토그라피라고 하며, 고압 송액 펌프와 고성능 충진제의 사용에 의해 분리를 고속으로 행하는 LC를 특히, 고속액체크로마토그래피(HPLC; High performance liquid chromatography)라고 한다. 이동상에 녹이는 시료가 분리의 대상으로 된다.
이번실험은 이 HPLC를 통해 우리가 흔히 접할 수 있는 음료 속에 있는 카페인을 분석하여 음료 안에 있는 카페인을 측정하는 실험이다. 카페인이란, 차, 커피 등에 함유되는 alkaloid(질소를 함유하고 염기성을 나타내는 물질)의 일종으로 중추신경을 흥분시키는 약리 작용이 있는 물질로써, 우리 조는 롯데칠성음료에서 나온 <칸타타-아메리카노>와 광동제약에서 나온 <비타500>음료에 들어있는 카페인을 측정하였다.
표준물질과 이 실제 시료의 크로마토그램을 비교해 실제 시료 안에 존재하는 카페인의 양을 계산할 수 있다.
실험
1. 장비
Ⓐ[ HPLC]¹
고성능 액체 크로마토 그래피(HPLC; High performance liquid chromatography)는 높은 압력으로 마이크로 크기 입자로 충전된 칼럼을 통해 용리시키는 정교한 분석법이다.미세한 입자 사용의 단점은 용매 흐름에 대한 저항이다. 최근까지 HPLC는 유속이 약 0.5~5mL/min이 되게 하기 위해 약 70~400bar의 압력에서 작동했다.
2004년에 장비는 1000bar이상의 압력에서 1.5~2𝜇m 지름의 입자들을 분리하기 위해 사용되었다. 이런 장비는 분리도를 증가시키거나 실험 시간을 줄일 수 있다. 보통 고압에서 1.5~2𝜇m인 입자를 사용하는 크로마토그래피를 초고성능 액체 크로마토그래피 (Ultra-Performance Liquid Chromatography, UPLC)라고 한다.
1) HPLC 의 분리: LC의 분리칼럼 중에는 고정상(충진제)과 이동상(용리액)의 2상이 존재하고, 혼합물 중의 각 성분이 이들 2상에 대한 친화성의 차이가 있으면 칼럼을 통과하는 사이에 그 차이가 증폭되어서, 각 성분의 분리가 달성된다. 고정상에 대한 친화성이 약한(이동상에 대한 친화성이 강한) 성분이 빨리 용출된다. (표1)
- 참고문헌
-
1) 실용적 HPLC법- 이론과 실제
저자: 홍선표역
출판사: 경희대학교 출판국
2) 최신분석화학 제 5판
저자: 박정학 여인형 이범규 이승호 이인호 공역
출판사: 자유아카데미
3) 논문: HPLC를 이용한 카페인의 분석법 개발 및 시판 식품중 함유량 조사
하상철 김희연 이영가 홍기형 이철원 김길생
식품의약품안전청 식품 첨가물평가부 대구미래대학
4) 네이버 지식백과
http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=296754&cid=368&categoryId=368
5) Caliper Life Sciences제조사
http://www.equipnet.com/browse/asset_view_print.aspx?listid=249857&assetid=239154
6)http://www.ebay.com/itm/Agilent-HP-Hewlett-Packard-1100-Series-HPLC-DAD-System-Diode-Array-Detector-/281170988091?pt=LH_DefaultDomain_0&hash=item417718cc3b#viTabs_0
7)http://www.gmi-inc.com/hp-agilent-1100-hplc.html
8)http://www.bionova-ls.com/on-line-ordering/product/view/12/57
9)네이버 지식백과-원심분리기
http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1586094&cid=2912&categoryId=2912
10) 간호학대사전- 간호학대사전, 대한간호학회, 1996.3.1, 한국사전연구사
11) 차생활문화대전, 정동효, 윤백현, 이영희, 2012.7.10, 홍익재
12) 화학용어사전, 화학용어사전편찬회, 윤창주, 2011.1.15, 일진사
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