실험보고서 - 세포 배양 실험

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2013.12.23 / 2019.12.24
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목차: Abstract
1. Introduction
2. Experimental
3. Results
4. Discussion
5. References

본문내용: Abstract
실험에 사용되는 암세포(A 549)의 medium제조 와 Cell-thawing, Cell-culture의 실험방법에 대해서 알아보았다. 암세포를 배양할 때는 몸 안에 있을 때와 비슷하게 적절한 환경을 만들어 주어야한다. 암세포가 몸 안에서는 면역에 의해 균이 없는 상태에서 죽지 않고 자라지만 체외로 노출된 상태이므로 균에 의한 오염이 되기 쉽다. medium제조와 Cell-culture시 깨끗하게 clean bench와 주변, 실험복 등을 70%ethanol로 소독하고 멸균된 상태에서 진행해야 한다. 배지가 암세포가 배지의 영양성분을 섭취하기 때문에 일정기간마다 배지를 교체해 주고 Subculture 주어야 한다. PLA(Poly Lactic Acid)와 PGA(Poly Glycolic Acid)의 공중합체로 PLGA-poly(lactic-co-glycolic acid)는 생분해성과 독소안정성, 생체적합성이 뛰어나기 때문에 의약계열에서 널리 이용되는 물질이다. 합성고분자로써는 드문 경우지만 치료용으로 인체에 사용할 수 있도록 승인 되었고, PLGA를 사용하면 약물 전달 체계에서 약물방출시기를 조절하여 한 번의 투약으로 짧게는 며칠 길게는 몇 달까지 약물의 효과를 지속시킬 수 있는 약물의 제조가 가능할 것으로 기대되며, PLGA내에 약물을 봉입하여 합성을 하기 이전에 연습단계로 PLGA를 PVA로 Oli in water Emulsion을 만든다. PVA(Poly Vinyl alcohol)는 물에 녹는 물질로 PLGA의 겉을 감싸 주는 역할을 해주며 동시에 유화제, 에멀션화제의 역할을 해주기 때문에 O/W Emulsion의 제조에 도움을 준다. 또한 대부분의 약물은 소수성의 성질을 갖는데 인체 내에서 소수성약물의 효율이 낮아 질 수 있기 때문에 이러한 현상을 방지하기 위해 친수성 물질인 PVA로 코팅 해준다. 이 실험에서 우리의 최종목적은 250nm 크기의 균일한 나노입자를 만드는 것이다. 나노입자의 크기가 모두 똑같을 수는 없겠지만 가능하면 250nm에서 입자크기 오차범위를 줄여야 하고 또한 표준크기인 입자가 적절한 수준으로 많이 나타나야 바람직한 합성이 이루어졌다고 할 수 있다. Q.D(Quantum dot, 양자점)를 PLGA 내에 봉입시켜 암세포에 투여하고 이후에 모습을 관찰하기 위해서 Q.D가 봉입된 PLGA를 제조한다. Q.D(Quantum dot, 양자점)란 약 2∼10㎚(나노미터) 크기의 중심체와 ZnS(황화아연)으로 이뤄진 껍질로 구성되며, 껍질 밖 표면에 고분자 코팅을 하기 때문에 통상 10∼15㎚ 크기의 나노입자를 가지게 된다. 양자점의 중심체로는 CdSe, CdTe, CdS가 주로 사용된다. Q.D는 좁은 파장대에서 강한 형광을 발생시킬 수 있으며, 입자가 작을수록 짧은 파장의 빛이 발생하고, 입자가 클수록 긴 파장의 빛을 발생하는 매우 특수한 성질이 있어 양자점의 크기를 조절하면 원하는 파장의 가시광선 영역의 빛을 모두 낼 수 있다. 그러나 Q.D는 구성하고 있는 물질은 인체에 사용하기 부적합한 중금속이 포함되어 생체에서 독성을 나타낼 수 있다. 그러한 이유로 생체적합성 고분자인 PLGA내에 Q.D를 봉입하여 비교적 안정성을 높이는 것을 목적으로 한다. 이렇게 PLGA 내에 봉입된 Q.D PBS에 용해시키고 우리가 직접 키운 암세포(A 549)에 Q.D가 봉입된 PLGA를 투여해보고 PBS만을 넣은 대조군 암세포와 비교해 본다.

참고문헌: 본문 참고
1. 세포배양학 개론 / 고려의학 / 김태전 저
2. 기능성 고분자 소재를 이용한 항암 나노의약품 개발동향 / 카톨릭대학교 생명공학과 / 이은성 저
3. 나노 약물전달체의 제조 및 응용 / 강원대학교 생명공학과 / 이정임, 유혁상 저
4. wikipedia search

사진 참고
1. 형광현미경 http://blog.naver.com/techsantech?Redirect=Log&logNo=40114093078
2. T-flask http://www.genedirex.com/popup_image.php?pID=540&osCsid=7766fb137f1ab1785111a51b51566d0c
3. Micro pipette http://www.enasco.com/product/SB45963M
4. 무균실험대
http://cafe.naver.com/umckorea.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=361&topReferer=http://cafeblog.search.naver.com%26imgsrc=20100607_250/umckorea_1275876385165W3wdD_jpg/%BB%E7%C1%F8100604_006_umckorea.jpg
5. 동결건조기
http://blog.naver.com/lbt2002?Redirect=Log&logNo=40100840921&topReferer=http://cafeblog.search.naver.com&imgsrc=20100211_170/lbt2002_12658687608204mDhz_jpg/12_lbt2002.jpg
6. Vortex
http://cafe.naver.com/biobaek.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=876&topReferer=http://cafeblog.search.naver.com%26imgsrc=20100907_36/backgmd_1283797864167h2888_jpg/vortex_backgmd.jpg
7. 회전증발기
http://blog.naver.com/kakkak0?Redirect=Log&logNo=50052195296&topReferer=http://cafeblog.search.naver.com&imgsrc=data29/2008/1/11/227/r2_01-kakkak0.jpg
8. 균질기 http://www.4science.net/

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