1. 실험 목적
Bradford Assay를 사용하여 이미 정량된 특정 단백질을 정량하고, 이를 통해 미지의 단백질을 정량한다.
2. 실험 원리
단백질이 당질이나 지질과 다른 점은 탄소, 수소 그리고 산소 이외에도 반드시 질소를 함유하고 있는 특징을 가지고 있는 물질들을 말한다. 또한 단백질이란 동식물체의 가장 중요한 구성 성분들의 하나인 동시에 동식물들이 생체로서의 기능을 수행하는데 있어서도 여러 가지 중요한 역할을 맡고 있는 물질들의 주요 구성 성분들로서 화학적으로 수많은 여러 종류의 아미노산들이 펩타이드 결합을 통해서 결합된 고분자 화합물들이라고 할 수 있다.
실험 결과 희석시킬 시 낮은 농도 값이 나오기 때문에 희석시키지 않고 실험하였다.2. 각 원침관에 모두 1 ml의 Bradford 시약을 넣고 잘 섞는다. 3. 10~30분 정도 두었다가 595 nm에서 흡광도를 측정하고, 표준용액을 이용하여 회귀방정식을 세우고 미지 단백질의 농도를 계산한다. 시료3개와 Bradford시약UV-Visible spectrophotometer검량선 세팅시료와 Bradford 1ml 혼합No.Concentration(g/L)Sample-0.63010.07820.08230.082Average0.080닭 털 단백질 구성성분(이론값)Bradford법
결과가 나오면 엑셀의 함수식 average를 이용해 평균을 구한다. 이 데이터들을 차트로 만들면 실험결과가 나온다.⑤ 구한 차트의 함수식을 구하고 R²의 값이 1에 가까운지 확인한다. 실험결과BSA가 담긴 Well에 PAB를 넣고 색깔의 변화를 관찰했을 때 단백질의 양이 많을 BSA 일수록 짙은 파란색을 띠었고, 희석이 많이 될수록 갈색을 띠게 되었다.변한 PAB를 가지고 Spectrophotometer에 넣어 595㎚로 분석을 한다.BSA0㎎/㎖0.18625㎎/㎖0.3725㎎/㎖0.745㎎/㎖1.49㎎/
실험 결과 및 고찰- 반 응 식- Rf값 계산>Rf (1번째 단계에서 benzylchloride)= 3.3 ~cm over 3.5 ~cm = 0.943>Rf (1번째 단계에서 A점)= 1.6 ~cm over 3.5 ~cm = 0.457>Rf (1번째 단계에서 B점)= 3.3 ~cm over 3.5 ~cm = 0.943>Rf (2번째 단계에서 benzylchloride)= 4.0 ~cm over 4.2 ~cm = 0.952>Rf (2번째 단계에서 benzylchloride)= 3.5 ~cm over 4.2 ~cm = 0.833>Rf (2번째 단계에서 C점)= 2.8 ~cm over 4.2 ~cm = 0.667>Rf (2번째 단계에서 D점)= 3.5 ~cm over 4.2 ~cm = 0.833>Rf (2번째 단계에서 E점)= 4.0 ~cm ov
단백질의 전기영동은 DNA 와 비슷하나 영향을 미치는 요소에 단백질 모양이 추가된다. 단백질의 모양에 따라서도 gel 을 통과하는 시간이 다르게 되는 것이다. 실험에서 전기영동 결과가 조금 희미하게 나왔는데 DNA샘플이 잘 잘리지 않았을 때에는 다음의 경우를 생각해 볼 수 있다. 첫째로, 효소의 활동성이 떨어진 경우를 생각해 볼 수 있다. 오래된 효소의 경우일수록 활성이 감소된다고 하는데, 무엇보다 상온에 오래 있었거나 보관 상태가 불량인 경
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hwp (아래아한글2002)
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