식품안정성 검사-알코올이 간에 끼치는 영향(Ethanol`s Toxicity in vivo& in vitro)
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- 목차
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-Introduction
-Material& Method
-Result
-Discussion
-Reference
-LC와 HPLC의 비교
-GC와 HPLC의 비교
-HPLC의 기기장치
-참고문헌
- 본문내용
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또한 임산부가 음주를 할 경우 기형 유발 작용을 한다. 어머니가 습관성 음주자인 경우 신생아 1,000명당 4-7명에서 태아알코올증후군 출현이 보고되고 있다. 이 증후군은 중추신경 장애, 성장지연, 얼굴이상 등 크고 작은 기형이 복합적으로 나타난다.
마지막으로 습관성 음주자에게서 구강 인후계의 암 발생율이 높다.
위와 같이 알코올은 인체에 매우 유해하며 그 중에서도 특히 간에 미치는 영향이 가장 큰 것으
보여진다. 이와 같은 이유로 알코올이 간질환에 어떤 영향을 끼치는지 알아보기 위해서 이 실험
을 설계하게 되었다.
독성평가에서 In vivo와 In vitro에서의 실험을 같이 하는 이유는 In vitro에서의 세포단위에서 실험은 경향성이 비교적 잘 나타나며 재현성도 높다. 또한 동물실험 등 생체 적용 단계 이전에 대략적인 range설정에 사용되며 생체 밖에서 세포 성장 억제력을 알아보는 과정을 거쳐야 하기 때문이다.
이후 In vivo에서의 실험은 비록 재현성도 낮고 경향성이 뚜렷이 나타나기 힘들지만 인간 생체에 가장 가까운 환경이기 때문에 인체에 적용하기 전 반드시 거쳐야 할 시험 단계이다.
따라서 독성평가에 있어서 In vivo와 In vitro 모두 빠져서는 안될 중요한 실험 과정이라 볼 수 있다.
<Trypan blue>
우리는 먼저 2주차에 Trypan blue 실험과 3주차에 MTT assay를 통해 In vitro에서 ethanol의 독성을 평가하였으며, 4,5주차에는 동물모델에 지속적으로 ethanol을 투여한 뒤 해부하여 6주차에 간 조직 내의 reduced glutathione level을 분석함으로써 In vivo에서의 독성평가를 실시하였다.
2주차의 Trypan blue 실험에서 우리는 50% ethanol의 control 대비 생존률을 대략적으로 구하였으며 이를 통해 MTT assay 실험을 설계하고 좀 더 자세한 ethanol에 의한 세포독성에 대해 알아보았다.
MTTassay는 살아있는 세포의 미토콘드리아 탈수소 효소작용(dehydrogenasese)에 의하여 노란색의 수용성 기질인 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolim bromide, Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide)를 자주색을 띄는 비수용성의 MTT-formazan 결정으로 환원시키는 미토콘드리아의 능력을 이용하는 검사법으로써 신속하고 정확하게 많은 양의 세포 증식거동을 측정할 수 있다. 자주색 결정은 DMSO나 solubilization solution에 용해되고 흡광도는 550m의 파장에서 최대가 되며, 이 파장에서 측정된 흡광도는 살아있는 세포의 수와 직선적인 상관관계를 나타내게 된다. 이를 통해 control 대비 농도별로 세포의 생존률을 측정하여 IC50를 구하고 독성을 평가하는 방법이다.
이후 위의 2가지 세포실험들을 배경으로 하여 동물실험을 시행하였고 5일간 농도별 ethanol을 경구투여한 후 해부하여 조직(간)의 reduced glutathione level을 분석하여 ethanol에 대한 최종적인 독성평가를 마무리 하였다.
Material& Method
세포독성실험
In vitro cytotoxicity test
<trypan blue>
시약 및 기구
- 참고문헌
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참고문헌
http://www.seumi.com,
D. A. Skoog 외 , 『기기분석의 원리』, 탐구당(1982),
박면용 , 『기기분석의 원리와 응용』, 녹문당(2000),
이대운 , 『크로마토그래피』, 민음사(1991),
최재성 , 『최신 분석화학』, 동화일보(2000)
http://www.unmc.edu/Pharmacology/receptortutorial/competition/IC50.htm
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