[공학] 단백질 분리 정제 실험-특정단백질(p-ERK)가 phosphorylation 되었을 때 cell 내에서의 발현 정도

단백질을 생산하기 위해 본래 존재하는 유전자보다는 생체 외에서 도입된 외래 DNA를 발현하여 단백질을 생산하는 것이 일반이다. 그래서 우리는 생산하고자 하는 단백질을 코딩하고 있는 유전자 sequence를 숙주 DNA 내로 삽입하여야 하고, 그 유전자가 숙주의 DNA 내에 안정적으로 정착하여recombinant DNA가 되었을 때 gene stability가 보장되어야 삽입된 유용생리활성단백질의 유전자가 안정적으로 단백질을 발현시킬 수 있다. 바이러스의 경우, 자신의 유전자

단백질을 SDS, urea 또는 2-mercaptoethanol과 같은 환원제로 용해시킨 후 SDS-polyacrylamide gel에 전기영동한 후 Coomassie brilliant blue로 염색하여 전기영동으로 분리된 단백질 대(band)를 확인하거나 nitrocellulose 또는 nylone membrane에 옮긴 후(단백질을 옮기는 이 과정을 western blot 또는 western transfer라고 한다) 단백질이 옮겨진 membrane에서 항원-항체 반응을 이용 특정 항체에 대한 항원(단백질)을 찾아내는 기법이다. 이때 사용하는 항체는 찾고자 하는 단백질(항원)에 대해

분리하는 것이 기본적인 방법이 된다. 따라서 많은 수의 표본을 보다 간편하고 빠르게, 또한 적은 양의 재료만 있어도 우수한 효율로 분리할 수 있는 기술이 필요하게 된다. 몇 년전 까지만 해도 염색체 DNA 분리과정은 적어도 하루 이상의 시간을 필요로 하였을 뿐만 아니라, 많은 양의 세포가 있어야 가능한 방법을 써 왔기 때문에 연구에 어려움이 많았다. 그러나 많은 과학자들과 시약 회사의 노력으로 인하여 현재는 약 1시간 정도면 적은 양의 세포에

때, DNA가 움직인 정도를 알 수 있게 하는 역할을 한다.Agarose Gel Electrophoresis:Agarose gel에 DNA와 loading dye의 mixture을 넣고, 전기를 걸어주면 DNA는 인산기 때문에 (-) charge를 가지므로 gel 내에서 (+)charge 방향으로 움직이게 된다. 이때 움직이는 속도는 DNA의 크기, 모양에 따라 다르므로, gel 내에서 DNA가 종류에 따라 분리되게 된다.◈ Reagentagarose, TAE buffer, ethidium bromide, prepared DNA, DNA ladder, DNA loading buffer◈ Apparatusmicrowave, gel cast, electrophoresis tank◈ Procedure1. 20m

때는 약간의 오차를 면치 못하는 것이다.i) 표준균배양액을 미리 만들어야 하며 이 표준균액을 평량, 계산실법, 건조균체량 및 질소정량법 등에 의하여 정확히 농도를 측정하여 보통 Formalin을 가하여 같은 규격의 광전비색시험관에 넣고 밀봉한다. 장내세균은 1~2000만개/m| 정도 내외에서 측정한다. 효모와 말무리는 세포가 크므로 균수가 세균보다 1/15~1/10 적은 것을 기준으로 표준균액을 만든다.ii) 배양액이 펩톤, 부용으로 되어있을 때는 균을 접종