단백질 정성반응 실험

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2009.12.20 / 2019.12.24
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목차: 1. 실험목적
2. 실험기구 및 시약
3. 실험원리
3. 실험방법
4. 실험결과
5. 고찰
6. 요약
7. 참고문헌

본문내용: 1. 실험목적
① 단백질 및 아미노산의 구조적 특이성과 정색반응간의 관계 탐색
② 시약의 종류에 따라 나타나는 색깔 확인 및 대조
③ 천연단백질 시료간의 반응결과 및 차이점 비교 평가
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2. 실험기구 및 시약
100ml mass flask, 20ml whole pipette, 200ml erlenmeyer flask(or beaker), pippetet, balance, D.W, 스포이드, Boiling water, test tube, 40% NaOH 용액, CuSO4.5H2O용액, 1% ninhydrin 용액, Millon 시약, 진한HNO3, gelatin, glycine, tryptophan, 난백, tyrosine, 난황희석용액, 우유희석용액, 당(maltose, glucose), citric acid
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3. 실험원리
1) Biuret reaction:1개의 탄소원자 또는 질소원자를 사이에 두고 2개의 －CONH기를 가진 것이나 직접 2개의 －CONH기 등이 결합하는 것에서 볼 수 있으며, 트리펩티드 이상의 폴리펩티드사슬을 가진 것이 발색한다. 또 이 반응에 의하여 발색하는 물질은 생성하는 비스(뷰타렛)구리(Ⅱ)산나트륨 Na2［Cu(C2H3O2N3)］이다.
2) Ninhydrin reaction: 닌히드린을 아미노산의 중성용액에 가하면 아미노기의 작용에 의해서 닌히드린 2분자가 축합하여 아미노산의 종류에 따른 특유한 색을 나타낸다. 예를 들면, 히스티딘은 청색, 히드록시프롤린은 오렌지색으로 변한다. 이 발색은 예민하여 50~100만분의 1 정도의 감도(感度)를 나타내므로, 아미노산의 검출에 이용된다.
3) Millon reaction: 밀롱시약을 시료에 첨가하면, 단백질이 있는 경우는 백색침전이 생기고, 이것을 60∼70℃로 가열하면 벽돌색으로 변한다. 이러한 반응은 단백질을 구성하고 있는 아미노산인 티록신 ·디옥시페닐알라닌 등의 페놀고리가 수은화합물을 만들고, 아질산에 의해 착색된 수은착염으로 되기 때문이다. 따라서 단백질이 아니더라도 페놀이나 살리실산 등도 발색한다.
4) Xanthoprotein reaction: 시료에 소량의 질산을 가하여 몇 분간 가열하면 황색이 되며, 다시 암모니아수를 가하여 알칼리성으로 하면 색이 진하게 되어 주황색에 가깝게 되는 반응이다. 이 반응은 페닐알라닌 ·티로신 ·트립토판 등의 아미노산의 벤젠고리가 질산에 의해 니트로화되어 황색의 니트로화합물이 되기 때문이다. 따라서 이들 아미노산을 함유하지 않는 단백질인 경우는 이러한 발색은 일어나지 않는다.

참고문헌: 1. 식품화학실험 10th
2. 한국식품과학교수협의회(2009), 식품(산업)기사, 경기파주, 지구문화사
3. http://academic.naver.com/view.nhn?doc_id=14063694

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생화학 실험 중요 포인트 요약 노트

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