[생명/생물]닭 근위(모래주머니)에서 키틴분해효소의 분리 및 정제 보고서
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현재 우리나라는 산업적으로 chitin과 chitosan의 효용가치가 높아 지고 있는 실정이다.
따라서 다양한 chitin, chitosan을 분해 할 수 있는 enzyme을 연구하는 것은 중요한 일이다.
이런 분해 효소로서의 키틴분해효소(chitinase)는 또한 생체 내에서의 기능에 대해서는 아직 많이 알려지고 있지 않기 때문에 과학적인 접근도 필요한 enzyme이라고 생각 되어 진다. 일단 키틴에 대해서 알아보면 N-acetyl-D-glucosaminie의 β(1,4)결합으로 이루어져 있으며 게 새우 등 갑각류의 껍질, 곤충의 큐티클 층, 오징어 같은 연체 동물의 골격과 버섯, 곰팡이의 세포벽 등에 다량으로 존재한다.(fig 1.)
이를 분해하는 효소인 키틴분해효소(chitinase) Chitin의 β(1,4) 결합을 가수 분해하여 절단하는 효소로 Chitinase의 경우 plant에서는 defense mechanism, seed development, 꽃의 개화에 관련이 있다고 보고 되고 있으며 2개 이상의 isozyme이 존재하나 plant에서는 chitin의 존재가 아직 발견되지 않았다. 미생물에서는 대부분 영양분 공급을 위해서 사용되어 지며 exochitinase가 많이 존재하며 동물의 경우 영양분의 공급을 위해 존재하거나 신호 전달에도 관여하는 것으로 알려지고 있지만 정확한 그 기능은 아직 밝혀지지 않았다. 이러한 키틴분해효소를 분리하는 실험을 시행하였으며 실험방법, 실험결과 그리고 그에 대한 고찰 순으로 정리하였다.
일단 닭근위에서 키틴분해효소를 분리하고 정제하기 위해 다음의 실험 순서로 진행하였다.(table 1)
닭근위 조직에서 키틴분해효소 추출 시 적정온도와 pH를 적절히 조절 해줘야한다.(효소 및 단백질 추출이므로 온도 및 pH에 민감) Table 2의 방법으로 추출하고 불순물을 제거하기 위해 투석을 사용하였다.
Fig 2. 투석(dialysis)
염석 또는 유기용매로 침전시켜 모은 단백질에는 아직 불순물로서 기타의 단백질이나 저분자물질, 무기염을 함유하고 있다. 저분자의 불순물을 제거하는 수단으로 흔히 사용되는 것이 투석(dialysis)이다. 무기염류와 저분자물질은 투과하나 단백질이나 고분자물질은 투과하지 않는 작은 구멍을 가진 막(셀로판 튜브 등)에 단백질 용액을 넣어 봉하고 증류수나 완충액 속에 장시간 넣어 두면 저분자물질은 막에서 투과하여 제거된다.
- 참고문헌
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▲ Refernce
• http://www.ajou.ac.kr/~biochem/lecture/protein.ppt
• http://www.shingu.ac.kr/%7Edolchoi/lc_bc/bc3-3.html
• http://search.empas.com/search/ok_pvw.html?pt=0&ft=2&i=5022731&q=folin&q2=folin&dv=a
&sn=1205443072&w=2b6c6d&dw=6d&vl=A&vn=1&ou=kin.naver.com%2Fbrowse%2Fdb_detail
.php%3Fd1id%3D11%26dir_id%3D11%26docid%3D683169&dd=1
• http://kin.naver.com/browse/db_detail.php?d1id=11&dir_id=110204&eid=eSy2kxiXNm5HRxoljCbVtPBcNL5vKNan
• http://kr.ks.yahoo.com/service/wiki/wiki_view.html?word=%C0%FC%B1%E2%C0%CC%B5%BF
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