균의 분리와 동정

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목차: 실험일지
1. 9/07 배지 만들기
2. 9/29 전날 streaking한 균주 확인후 분리 배양
3. 9/30 분리배양 결과 확인
4.10/06 전날한 test 결과 확인 (IMVIC test, urease test, CAMP test)
5.10/07 test 결과 추가 확인6
6.대상균 특성 조사
7.10/12 PCR 후 결과 확인
8.10/19 CFU 확인
9.10/26 VITEK을 이용하여 잡균 확인

본문내용: <XLD agar>
Autoclaved D.W
55g/D.W 1L
boiling
충분히 식힌 뒤 붓기
<MacConkey>
50g/D.W 1L
boiling
autoclave
충분히 식힌 뒤 붓기
<EMB>
Mac과 동일
36g/D.W 1L
<urea>
38.7g/D.W 1L
Autoclaved bottle
filtration(0.2㎛ pore)
<Citrate>
24.2g/D.W. 1 L
boiling
Autoclave
충분히 식힌뒤 사면 배지 제작
시험관에 붓고 기울임
일반적 특성
Escherichia coli (commonly abbreviated E. coli)
독일의 세균학자인 Theodor Escherich가 발견하고, 명명함.
Gram negative 간균(rod-shaped bacterium)
대부분의 E.Coli strain은 무해하나, 혈청형 O157:H7과 같은 경우는 사람에서 심각한 식중독을 유발할 수도 있다. 무해한 strain들은 장에서 normal flora를 형성하는데, 이는 vitamin K2 생성하고 장에서의 다른 병원성미생물의 증식을 억제함으로써 숙주에게 긍정적인 효과를 가져다 준다.
E. Coli는 온혈동물의 하부 소화기에서 잘 발견할 수 있다. 그러나 이는 장에서만 증식할 수 있는 것은 아니며, 어느 정도 기간은 체외에서도 생존할 수 있다. 따라서 이는 분변 검사 등을 통하여 오염도를 조사하는데 적당한 지표균 (indicator organism)이 된다.
또한 E.Coli 균은 쉽게 배양할 수 있으며, 유전정보가 상대적으로 단순하여, 원핵세포 모델 연구에 널리 사용된다. 또한 생물공학, 미생물학 등에서도 많이 이용된다.

배양성 (MacConkey, EMB, XLD, Blood, Chocolate agar)
MacConkey agar
bile salts (Gram-positive균의 성장 억제를 위해서 들어있음, 단 Enterococcus와 Staphylococcus aureus는 예외), crystal violet dye (Gram-positive균의 성장 억제를 위해서 들어있음), neutral red dye, lactose 그리고 peptone을 포함하고 있는 배지이다.
여기에 E.Coli 를 배양하면, deep red colonies가 생성된다. E.Coli를 배양하면, lactose를 분해하여 나오는 hydrogen sulfide 때문에 배지의 pH가 떨어지게 되는데, 이 때문에 배지가 검게 변하게 된다.
EMB (Eosin methylene blue) agar
Gram-negative 균을 특이적으로 자라게 할 수 있는 배지이다. 이 배지는 eosin과 methylene blue를 6:1의 비율로 섞어 만든 것인데, 여기에서는 Gram-positive 균이 잘 자랄 수 없다. 한편, 이 배지에서는 Gram-negative 균 을 lactose를 분해할 수 있는 것(예 : E.Coli)과 할 수 없는것 (예 : Salmonella)을 색깔로 구분 할 수 있다. E.Coli와 같이 lactose를 분해할 수 있는 균은 black colony로 나타나게 된다.

참고문헌: http://www.vetory.com/bbs/zboard.php?id=seminar_09&no=88
http://terms.naver.com/item.nhn?dirId=1716&docId=24985
Testbook of Diagnostic Microbiology, Connie R.Mahon 외 2인, Saunders, 3rd edition
http://blog.naver.com/gp9208?Redirect=Log&logNo=110001585957

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