[실험기기분석] HPLC(High Performance Liquid Chromatography)를 이용한 Mixture 시료 정성 분석 및 실습
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- 목차
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Date
Subject
Purpose
Material
Apparatus
Principle
Procedure
Result & Observation
Discussion
- 본문내용
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Apparatus
TLC (Thin layer chromatography)
Silica gel (glass type TLC 판), pipette, blue tip, e-tube, syringe, needle, UV lamp, 연필, 자, wipeall
HPLC (High Performance Liquid Chromatography)
DIONEX Ultimate 3000 HPLC 기기, Acclaim 120 C18, Bead 5μm 4.6 x 150mm HPLC column(Reverse Phase Chromatography), injection syringe.
Principle
TLC (Thin layer chromatography)
Plate liquid chromatography(박층액체크라마토그래피)중 하나이다. 유리판등에 실리카 흡착제의 얇은 막을 입혀 고정상으로 하고, 유기용매를 이동상으로 하여 시료내 혼합물질을 단일물질로 분리하는것이다. 분리된 시료의 이동한 거리를 Rf값으로 나타낸 후 표준 물질과 비교하여 정성적인 분석을 할 수 있다.
실험 방법: 먼저 developer(이동상)를 제조한다. 시료와 샘플을 각각 취하여 TLC판에 점적(spotting)하여 이를 앞에서 제조한 용매로 전개하여 그 성분을 분석한다. 이 때 시료와 샘플은 반드시 제조한 이동상에 녹아야 한다. 보통 2/3정도 전개되면 이를 꺼내어 건조시킨 후 UV Lamp를 쪼이거나 발색시약을 뿌려 분석 결과를 확인할 수 있다.. 흡착제로는 주로 알루미나(Al2O3), 실리카겔(SiO2), 셀룰로오스 등이 사용된다. 물질을 이동상을 선택할 때에는 극성을 고려해야 한다. 이동상의 극성이 매우 강하면 분석할 시료들을 모두 빠른 속도로 전개하므로 resolution이 낮아지고 극성이 매우 낮으면 시료들을 전개할 수 없다.
HPLHPLC (High Performance Liquid Chromatography)
역상크로마토그래피 는 고정상으로 non-polar한 물질을 이용하고 이동상으로 polar한 물질을 이용하게 된다. 즉, column에 고정상으로 hydrophobic한 것을 채우게 되는데 이때, 보통 극성이 낮은 탄화수소(C18, C8 등)를 이용한다. Polar한 이동상과 분리하고자 하는 mixture을 함께 섞어서 column내로 흘려 보내주게 되면, mixture에 포함된 non-polar한 물질은 고정상과 hydrophobic interaction을 형성하게 된다. 따라서 극성이 높은 물질이 먼저 분리된다.
Procedure
TLC (Thin layer chromatography)
1. 유리병3개에 labeling을 하고 농도 비율이 각각 1:10, 1:1, 100:1인 n-hexane/ethyl acetate를 선택하여 유리병에 각각 3ml씩 담는다.
2. Silica gel glass type TLC 판의 밑부분에 연필과 자를 사용하여 기준선을 긋고 네 가지 시료를 찍을 위치를 5mm 간격으로 표시한다.
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