Preparation of Competent E.coli using Calcium chloride

Competent cell 이란 ?정상적인 bacteria 에 화학적 처리를 하여 DNA가 잘 들어갈 수 있게 만든 cell 을 의미 합니다. 화학처리에 쓰이는 시약은 다음과 같이 여러가지가 있으며 이 중 가장 중요한 것은 Calcium Chloride 이다. ․Calcium Chloride ․Manganase Chloride ․Hexamminecobalt Chloride ․Dimethyl Sulfoxide (DMSO) 5) Competent cell 을 이용한 Transformation 의 과정CaCl2 로 처리하여 competent cell 로 만들면 plasmid 가 cell 에 들어갈 수 있게 된다. Heat shock 을 가하면 plasmid 가 cell 안으로 들

of genomic DNA and PCR productGel electrophoresis of total RNAIntroductionPCR(polymer chain reaction)은 DNA의 원하는 부분을 증폭하는 방법이다. DNA molecule의 어느 부분이든지 그 border sequence만 알면 이 방법을 통해서 증폭할 수 있다. PCR은 기본적으로 denaturation, annealing, extension의 세 단계로 구성되어 있고, 이 과정이 반복되면서 DNA가 증폭된다. 기본적으로 PCR을 구성하고 있는 요소들에는 DNA template, primer, dNTP, polymerase등이 있으며, PCR 과정에서 그것의 sensitivity와 accuracy에 가장

of DNA with Restriction EnzymeExperiment 2 – Agarose Gel ElectrophoresisExperiment3- Gel Purification◇ Date: 2000. 00. 00 화요일◇ Subject: DNA sub-cloning 2단계, 3단계◇ Principles◇ ProcedureExperiment 1 – Ligation Reaction, Experiment 2- Preparing Competent BacteriaExperiment 3 – Heat Shock Transformation◇ Date – 20000. 00. 00 수요일◇ Subject: DNA sub-cloning 3단계◇ Principles◇ ProcedureExperiment 1- Selection of transformation◇ Date: 20000. 00. 00 목요일◇ Subject: DNA sub-cloning 4단계 clone 증폭

Calcium Cloride는 Cell Wall에 영향을 주고 또한 DNA Molecule이 Cell Surface에 흡착되도록 하는 것으로 알려져 있으며 DNA의 실제적인 Cell 내부로의 흡수는 Heat-Shock에 의해 촉진되는 듯 하다.다. Eliminating Restriction System of E.Coli외부 DNA가 E.coli host 내로 Introduce되었을 때는 앞에서 설명한 것처럼 Host cell의 Restriction System에 의해 공격받게 된다. 이러한 System의 일반적인 특징은 DNA의 Sequence외에도 DNA Source의 Post-replicational modification에도 관련된다.즉 Adenine이나 Cytosine의 Me

Calcium Cloride는 Cell Wall에 영향을 주고 또한 DNA Molecule이 Cell Surface에 흡착되도록 하는 것으로 알려져 있으며 DNA의 실제적인 Cell 내부로의 흡수는 Heat-Shock에 의해 촉진되는 듯 하다.다. Eliminating Restriction System of E.Coli외부 DNA가 E.coli host 내로 Introduce되었을 때는 앞에서 설명한 것처럼 Host cell의 Restriction System에 의해 공격받게 된다. 이러한 System의 일반적인 특징은 DNA의 Sequence외에도 DNA Source의 Post-replicational modification에도 관련된다.즉 Adenine이나 Cytosine의 Me