LAB 02: 대장균으로부터 chromosomal DNA의 분리

DNA구조를 이용한 동식물의 복제나 강철섬유 등 새로운 물질제조를 가능하게 한다. 전자공학 분야에서는 나노미터의 정밀도가 요망되며, 이것이 실현된다면 대규모 집적회로(LSI) 등의 제조기술은 비약적으로 향상될 것이다.우리나라에서는 2002년 나노기술개발촉진법을 제정하여 국가적으로 나노기술의 육성 및 발전을 꾀하고 있다. 법률적으로 나노기술은 나노미터 크기의 범주에서 조작분석하고 이를 제어함으로써 새롭거나 개선된 물리적화학적

substrate의 존재 하에서 GFP를 발현하는 clone을 sorting하여 selection4)Agar plate에서 sorting된 세포 colony분리Metagenomic library screening 방법2)Metagenomics의 적용새로운 효소나 항생제의 발견-indirubin, terragiene A,B주변환경에 대한 심층적 이해-서해안 갯벌그 외의 방법WGS(whole genome shotgun) sequencing-microarrary를 이용Referenceshttp://blog.naver.com/jazzhare?Redirect=Log&logNo=140022831590, 김창진, 천동식, 과학동아, 2003년http://www.scq.ubc.ca/?p=509

DNA 분자는 하나 이상의 단백질 분자에 의해 서로 다른 형태의 접힘을 통해 치밀한 구조를 형성함1) Histon과 염색질- 진핵세포의 염색체 DNA 분자는 histone이라는 강염기성 단백질에 부착되어 있음- 염색질(chromatin) : DNA와 histone의 복합체- Histone : 5 종류- H1, H2A, H2B, H3, H4- Lys, Arg 등의 양전하 아미노산이 풍부함: 정전기적 인력(electrostatic attraction)에 의해- 음전하의 DNA의 인산기들과 결합- 고농도의 염용액(0.5 M NaCl)에 염색질을 넣으면 histone과 DNA는 분리

DNA를 넣어준 것이다. 그러므로 ampicillin에 저항성을 나타내는 세포들이 가장 많이 나타났다. 세 번째plate는 ligation시킨 것으로 trasformation 된 것중 resistance를 지닌 trasformed cell들만 배지에서 자랄 수 있게 된 것을 볼 수 있다.조사2) Plasmid DNA를 분리할 수 있는 다른 방법을 조사해 보았다→ 염색체 DNA와 플라스미드 DNA의 차이점 이용해서 분리할 수 있다. * 크기 : 가장 큰 플라스미드의 크기는 대장균 염색체 크기의 8%밖에 안된다.* conformation : 분자 전체

DNA를 분리하는 기본원리는 다음과 같다.(1) 우선 세포를 resuspension하고 안정화시키는 solution I (glucose, EDTA Tris buffer, pH8.0)을 넣어 lysozyme처리를 하여 세포벽의 peptidoglycan 층의 결합을 잘라준다. 그러나 그람 음성 세포벽에는 peptidoglycan뿐만 아니라 lipopolysaccharide, 단백질 등도 함유되어 있으므로 세포벽이 완전히 제거되지는 않은 spheroplast상태가 된다.(2) alkali(NaOH)와 SDS가 들어있는 solutionⅡ를 넣어 세포를 터트리고, 이 과정에서 plasmid DNA와 chromosomal DNA가