[세포생물학] Pax4 gene expression에 의한 Insulin 생성세포 분화촉진
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- 목차
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1.Introduction
2.연구에 이용된 실험기법 및 절차
3.Basic protocol
4.Nestin+ selection protocol
5.Histotypic culture model
6.Translation & Glucose 검사
7.Discussion
- 본문내용
-
insulin producing cell 을
효과적으로 생산함으로써
새로운 당뇨치료법으로 기대됨
islet-like cluster를
생산하기위해 사용
당뇨 치료를 위한
선택사항으로 촉망됨
Pax6 level은 Pdx1+ cell이 모든단계에서 현저하게 높음.
반면 Pax4+ cell에서의 Pax6 level은 초기단계에서는 촉진되었다가 단계가 지날수록 상당히 낮아짐
Pax6
→α-vs. β-cell specification에서 Pax4의 specific 조절 기능이 있음
Pax4와 Pdx1 발현이 shh, isl1, Pdx1 전사수준, 초기 췌장분화에 영향을 미치는 gene에서는 효과가 없다는 걸 보여준다.
endocrine precursor specification을 control하는 gene의 발현 수준은(ex. ngn3, Pax6) Pax4+ cells(& Pdx1+)에서 up-regulated된다.
Pax6 transcript level의 초기 활성화와 나중의 Pax4+ cells의 down-regulation은 α-vs. β-cell specification에서 Pax4의 specific 조절 기능으로 설명될 수 있다.
결론 - Pax4은 미분화 ES cell을 내분비 insulin-producing cells로 이끄는 중요한 역할을 한다.
wt cell의 분화는 4+28d단계에서상당한 Pax4+ 전사 수준의 결과를 가져옴.
Pax4+cell 0.39 LI(4+28d)
insulin-positive cell의 80%
wt cell 0.15 LI(4+28d))
insulin-positive cell의 20~25%
glucagon 표지에서는 wt cell, Pax4+cell 간 상당한 차이는 관찰되지 않음
성숙한쥐의췌장(E) β 세포
→ 인슐린이 표지된 분비과립을 보임
insulin-positive 과립
→ 성숙한 쥐 췌장 β 세포의 분비 과립과 비슷한 크기 (4E)
→ 밀도 : 성숙한 β 세포(4E)보다 spheroid(4D)에서 유래한 Pax4+에서 더 낮음
(cf.분화된wt 세포-분비과립은 보이지 않고 때때로 세포질 insulin표지를 보임)
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