[단백질분리정제 실습] SDS-polyacrylamide gel electrophoresis

분리하여 상등액에 있는 단백질들을 추출.Gel 만들기 – 이 과정부터 직접 실습한 내용임.Purpose : Electrophoresis에 사용할 Acrylamide Gel을 만든다.Principle:Acryamide-bisacrylamide 29:1 : solvent의 역할을 하며, 매우 강력한 신경독성(neurotoxic)을 나타내며 이 효과는 축척 되기 때문에 꼭 장갑을 착용하여야 한다. bisacrylamide를 가교제로 중합한 polyacrylamide gel은 acrylamide와 가교제의 농도 및 비율에 의해 gel 내 미세통로의 크기를 조절할 수 있어 다양한 크기의 생체 분자

SDS-Polyacrylamide gel의 구성” 을 참고하여 12% polyacrylamide gel을 각 조당 1판씩 만든다.SDS loading dye를 넣고 2분간 boiling한 샘플을 SDS-PAGE에서 loading한다.12% polyacrylamide gel을 well을 잘 청소하고 sample을 loading한다.130V에서 1시간 전기영동을 한다.running이 끝나면 gel을 분리하여 staining solution에 30분간 staining한다. Running이 끝나면 stacking gel 부위를 잘라내고 separating gel 부분만을 유리판에서 떼어내어 coomassie blue staining 용액에 넣어 염색을 통해 단백질 밴드를 가시

단백질 분리 및 정제 실습 보고서▶ Date 2011. 5. 24▶ Subject :western blotting 을 이용한 protein separation과 purification▶ Purpose : House keeping gene에서 발현되는 β-actin과 Insulin 작용기작 중에 존재하는 단백질인 P-ERK의 분리 정제▶ PrincipleSDS-PageSDS-Page는 단백질의 질량에 따른 특성을 이용하여 분리해 내는 방법 중 하나이다. 먼저 SDS라는 detergent를 이용하여 공유결합이 아닌 아미노산의 곁사슬 간의 상호작용을 방해하여 단백질을 변성시켜 펩티드 사슬의 형태

분리하는 실험을 시행하였으며 실험방법, 실험결과 그리고 그에 대한 고찰 순으로 정리하였다. 일단 닭근위에서 키틴분해효소를 분리하고 정제하기 위해 다음의 실험 순서로 진행하였다.(table 1)닭근위 조직으로부터 키틴분해효소의 추출Anion exchange chromatography를 이용한 단백질 분리Cation exchange chromatography를 이용한 단백질 분리HIC chromatography를 이용한 단백질 분리Lowry-Folin 법을 이용한 단백질 정량SDS-PAGE를 이용한 전기영동Table 1. 실험순서 각 1주

실습 때와는 다르게 화기애애한 실험분위기가 좋았다. 특히 단순 미생물을 배양하는 것이 아니라 그 미생물의 gene을 이용해서 무언가를 한다는 것이 매우 흥미 있었다. 또한 우리가 배운 gene cloning 기술이 모든 유전공학의 기초가 된다는 사실을 알고 있기 때문에 열의를 가지고 참여할 수가 있었다.실험을 시작해서 처음에는 어떻게 해 나가야 하는지 갈피를 잘 잡지 못했다. 마이크로미터 단위의 물질들을 받아서 이걸 가지고 무얼 해야 하는 생각이 들