실험보고서 Plasmid 분리 실험 & Agarose gel을 이용한 plasmid 전기영동

실험보고서Date2010. 11. 08. 월요일 19:00 – 24:002010. 11. 09. 화요일 12:50 – 13:20, 19:00-22:002010. 11. 10. 수요일 18:10 - 18:452010. 11. 11. 목요일 19:00 – 22:302010. 11. 12. 금요일 19:00 – 23:30SubjectⅠ. DNA sub-cloning1. 첫째 날-Restriction enzyme 처리-Gel electrophoresis(전기영동으로 FabG DNA와 pET-14b vector 확인)-Gel purification으로 insert gene 분리2. 둘째 날-Ligation (pET-14b + FabG)-Competent Cell 만들기-Heat-Shock을 이용한 Transformation-LB agar plate에 도말3. 셋째 날-Transformant 확인-LB broth에

분자생물학실습 실험보고서1. Object제한효소 활용 및 Ligation, 전기영동, plasmid prep. 등의 여러 실험을 통해 Gene cloning의 전반적인 실험 및 이해를 하고, PCR의 기초적인 간단한 실험을 함으로써 DNA와 유전자를 다루는 molecular biology에서의 이론적 측면뿐만 아니라 실험적인 측면 또한 함양한다.2. Date실험기간: 2011년 11월 7일 – 11일, 총 5일3. Experiment3.1. Day 1 - 제한효소를 이용한 DNA 절단 및 분석, Ligation3.1.1. Digestion of DNA with Restriction EnzymeI. Apparatus- Water b

Agarose Gel Electrophoresis전기영동 시 DNA마다 이동속도가 다른 것을 이용하여 유전자를 분리한다. 이 때, DNA분자의 크기가 클수록 느리게 이동한다. Agarose gel 전기영동 시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인에는 DNA 분자의 크기, agarose의 농도, DNA형태, 전압, 전기장의 방향, ethidium bromide, 그리고 전기영동 buffer의 성분과 이온강도 등이 있다.DNA 분자의 크기가 크고 Agarose의 농도가 높을수록 DNA는 더 느리게 이동한다. DNA 형태에서는 supercoiled DNA가 가장 빨리 움직이

이용하여 물질을 분리할 수 있다. 그러므로 전기영동법은 아미노산, 뉴클레오티드, 단백질과 같은 하전된 물질들을 분리하는데 이용된다.우리가 한 실험에서는 plasmid를 전기영동 하였다. plasmid는 음전하를 띄므로 전기영동을 해주면 +극으로 이동한다.agarose gel 전기영동 시 DNA의 이동속도에 영향을 주는 요인에는 DNA 분자의 크기, agarose의 농도, 전압, DNA의 형태, 전기장의 방향, agarose gel과 buffer의 성분 등이 있다.DNA ladder은 agarose gel 전기영동에 쓰이는

plasmid의 size가 정확한지 확인한다.(이 때, loading dye가 들어있지 않기 때문에, 반드시 DNA loading dye(6x)를 첨가한 후에, gel에 loading한다.)※실험 방법 중 8번 과정과 D.W, Nde I , Nco I의 조성의 조금씩 변화를 주었다.원심분리기 모든 조성이 첨가된 배지우리가 사용한 loading dye agarose 젤에 담는 과정실험결과 및 고찰생소한 용어들이 많이 나오고 실험 도중에 buffer용액들에 대해서 이해가 되지 않아서 개인적으로 인터넷으로 찾아보면서 보고서를 쓰는 과정