[생태학실험] DNA결찰(DNA Ligation)

DNA를 glass에 붙여 분리1) glass fiber : glass fiber를 membrane형태로 column에 붙여 분리 2) glass bead : DNA를 glass bead에 붙여 분리Freeze-squeeze : gel을 얼렸다 원심분리 이용해 DNA짜는 방법Gel에서 DNA 분리 방법Glass fiber 장점100bp-10kb의 DNA fragment를 분리할 수 있다.Agarose gel로부터 pure DNA fragment를 얻을 수 있다.Isolation한 DNA fragment를 바로 ligation enzyme reaction등에 바로 사용이 가능하다.Glass fiber 원리High salt존재시 glass fiber membrane에 선택적으로 DNA bindingChaotropic salt(or hi

Miniscale preparation of plasmid DNAModern Biology Experiment IIFall semester 2010실험 목적Cloning Plasmid를 Transformation 시킨E. coli로 부터 Plasmid를 추출 한 뒤, 제한효소 처리를 통해서 Insert DNA(H2AX)가 Plasmid안에 제대로 들어갔는지 확인한다Chromosomal DNA Vs PlasmidChromosome DNAPlasmidNucleic acid typeDNADNALinear and CircularCircularCircularLength4.5Mbp2~200KbpPlasmid extraction methodsDetergentNonionicIonicHeatpH(Alkali)Boiling Method - HeatCell + Triton X-100 + Lysozyme + HEAT = Denaturation of DNACooling downChromos

DNA SequencingPurpose of ExperimentDNA sequencing을 통해 mini-prep 하여서 얻어낸 plasmid에 삽입된 gene이 H2AX gene 이 맞는지를 확인한다What is DNA Sequencing? Biochemical method for determining the order of the nucleotide basesAdenine, Thymine, Cytosine, and GuanineHuman Genome Project 를 통해 관련 기술이 빠르게 발전DNA sequencing techniquesMaxam and Gilbert Sequencing1976~1977, developed based on chemical modification of DNA and subsequent cleavage at specific bases. Can use purified DNA directlyChallenge:Technical complexity, extensive use o

1. 실험제목2. 실험목적3. 실험과정4. 실험결과Ligation of DNA두 인접한 nucleotide의 3 hydroxyl과 5 phosphate간에 phosphodiester 결합을 촉진키는 기능을 하는 ligase를 이용하여 DNA상의 nick을 공유 결합적으로 연결한다.* Sample DNA ( lambda DNA ) 준비.- lambda DNA를 제한효소( EcoRⅠ, Hind Ⅲ )로 처리하고, 전기영동으로 cutting 된 것을 확인 한다.- DNA purification을 실시한다.* Ligation- 다음과 같이 반응조건을 설정한다. DDW : 3㎕5×ligase buffer : 2㎕sample DNA : 4㎕T4 DNA ligase : 1

1. 실험제목 Ligation of DNA2. 실험목적 두 인접한 nucleotide의 3 hydroxyl과 5 phosphate 간에 phosphodiester 결합을 촉진시키는 기능릉ㄹ 하는 ligase를 이용하여 DNA상의 nick을 공유 결합적으로 연결한다.3. 실험원리 * 기초지식1956년 A.Kornberg와 그의 동료들은 새로운 DNA가닥을 합성할 수 있는 효소를 발견하였으며, 이를 DNA polymerase(후에 DNA polymerase I이라고 명명)라고 명명했다. 이 효소는 DNA 이중나선의 한쪽 사슬을 필요로 하며, 이 한쪽 사슬을 새로운 염기가 결합하