[생화학 실험] Brad for assay 와 BCA assay를 이용한 단백질 정량
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- 목차
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목 차
1. 실 험 제 목 : Brad for assay 와 BCA assay를 이용한 단백질 정량
2. 실 험 일 시 : 2010. 9. 27.
3. 서 론
1) Bradford Assay
2) BCA Assat
4. 실 험 목 적
5. 실 험 재 료
6. 실험 기기
7. 실험 방법
1)Brad for assay
2)BCA assay
8. 실험 결과
1)Bradford assay
①standard cuve
②미지시료
2) BCA assay
9.고찰
1)Bradford assay
2)BCA assay
- 본문내용
-
2) BCA Assat
현제 Bradford Assay와 함께 가장 많이 쓰이고 있는 단백질 정량방법이다. Lowry assay를 개량한 방법으로 Folin시약 대신 bicinchoninate(BCA)를 사용한다는 차이점이 있다. 단백질이 구리 이온Cu 2+, Cu 1+)을 환원 (Reduction) 시킬 수 있는 성질을 이용한다. 단백질에 의해 환원 된 구리 이온은 BCA용액과 반응을 해서, 보라빛의 화합물을 생성하게 된다. 이 화합물은 빛의 특정 영역(562nm)에서 구리 이온이 담긴 용액과 BCA용액 각각보다 빛의 흡수율이 높기에, spectrophotometer를 사용해서 측정하면 흡수율 차이를 측정할 수 있다. 단백질의 양이 많으면 보다 많은 보라빛 화합물이 생성되었을 것이다. 그리고 그 화합물은 빛을 더 많이 흡수하니까 흡수율이 증가하고, 그것에 비례해서 샘플 안에 있는 단백질 양을 측정 할 수 있다.
- 장점
① 일반적인 버퍼물질에 간섭을 덜 받는다
② 높은 온도에서 한다면 보다 민감하고 빠른 반응을 할수 있다
③ 계면활성제와 같이 사용할 수 있다.
④ 반응시약이 안정적이다.(최종 시료의 안정성)
⑤ 서로다른 단백질 사이에 반응의 차이가 거의 없다.
⑥ Lowry assay를 사용했을 때보다 방해를 주는 물질이 없다.
- 단점
① 반응 시간이 느린 편이다.
② 측정 후 단백질이 변질 될 수 있다.
4. 실 험 목 적 : 알고 있는 여러 가지 농도의 BSA용액을 만들어 흡광도를 측정하여 standard curve를 그리고 Brad for assay 와 BCA assay를 이용하여 미지 시료의 단백질을 정량해 본다.
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