미생물실험]Plasmid DNA purification and 전기영동(Electrophoresis)

실험보고서Date2010. 11. 08. 월요일 19:00 – 24:002010. 11. 09. 화요일 12:50 – 13:20, 19:00-22:002010. 11. 10. 수요일 18:10 - 18:452010. 11. 11. 목요일 19:00 – 22:302010. 11. 12. 금요일 19:00 – 23:30SubjectⅠ. DNA sub-cloning1. 첫째 날-Restriction enzyme 처리-Gel electrophoresis(전기영동으로 FabG DNA와 pET-14b vector 확인)-Gel purification으로 insert gene 분리2. 둘째 날-Ligation (pET-14b + FabG)-Competent Cell 만들기-Heat-Shock을 이용한 Transformation-LB agar plate에 도말3. 셋째 날-Transformant 확인-LB broth에

DNA & Plasmid DNA from Bacteria가. Agarose gel ElectrophoresisAgarose Gel 은 DNA Fragment을 Size에 의해 분리하는데 매우 유용한 Tool로써 수백개의 Base Pair를 가진 DNA로부터 20kd까지의 DNA Fragement을 분리해 낼수 있다. 또한 Agarose Gel Electrophorsis를 이용함으로써 보다 큰 DNA Fragment (1000 - 2000Kd 에 달하는) 까지도 분리해 낼수 있다.Agarose Gel Electrophoresis는 원리상으로는 SDS-PAGE등의 다른 Electrophoresis 방법과 유사하다. 즉 DNA Molecule은 Negative Charge (Phosphate Backbone의) 를 띄고 있기 때문

DNA & Plasmid DNA from Bacteria가. Agarose gel ElectrophoresisAgarose Gel 은 DNA Fragment을 Size에 의해 분리하는데 매우 유용한 Tool로써 수백개의 Base Pair를 가진 DNA로부터 20kd까지의 DNA Fragement을 분리해 낼수 있다. 또한 Agarose Gel Electrophorsis를 이용함으로써 보다 큰 DNA Fragment (1000 - 2000Kd 에 달하는) 까지도 분리해 낼수 있다.Agarose Gel Electrophoresis는 원리상으로는 SDS-PAGE등의 다른 Electrophoresis 방법과 유사하다. 즉 DNA Molecule은 Negative Charge (Phosphate Backbone의) 를 띄고 있기 때문

분자생물학실습 실험보고서1. Object제한효소 활용 및 Ligation, 전기영동, plasmid prep. 등의 여러 실험을 통해 Gene cloning의 전반적인 실험 및 이해를 하고, PCR의 기초적인 간단한 실험을 함으로써 DNA와 유전자를 다루는 molecular biology에서의 이론적 측면뿐만 아니라 실험적인 측면 또한 함양한다.2. Date실험기간: 2011년 11월 7일 – 11일, 총 5일3. Experiment3.1. Day 1 - 제한효소를 이용한 DNA 절단 및 분석, Ligation3.1.1. Digestion of DNA with Restriction EnzymeI. Apparatus- Water b

전기영동을 통해 PCR product가 있는지 확인한다. 새로운 LB plate에 white colony를 stacking 한 후 37℃ incubator에서 배양한다. 4. DNA purificationCloning된 vector DNA를 추출해내기 위해 Wizard Plus SV Minipreps(Promega)를 사용한다. 먼저 ampicillin이 첨가된 LB-Broth 2㎖를 tube에 넣어주고 여기에 37℃ incubator에서 배양중인 plate에서 colony를 따서 넣어준다. 37℃ shacking incubator에서 overnight culture(18시간정도)한다. Overnight culture한 용액에서 1㎖를 꺼내 e.p tube에 넣어주고 8,000 rpm으로 10분