[분자생물실험] DNA sub-cloning을 위해 원하는 유전자 분리

분자생물학 실습 HGU◇ Date: 20000. 00. 00 월요일◇ Subject : DNA sub-cloning 1단계◇ PrinciplesPlasmid: Bacterial cell 내에 염색체와는 독립적으로 존재하며 독자적으로 증식할 수 있는 Circular DNA로 세균의 생존에 필수적인 것은 아니다. Plasmid는 대부분 하나 이상의 유전자를 가지고, 이들 유전자는 종종 Host bacteria에 의해 나타나는 유용한 특징을 담당하고 있다. 예를 들어, 항생제의 정상적인 독성 농도에서 생존하는 능력은 항생제 저항성 유전자를 가진 Plasmid가 Ba

실험 보고서분자 생물학 실습 ▶원리Restriction enzyme 처리이 실험에서 우리는 아무 처리되지 않은 plasmid와 foreign gene을 plasmid에 삽입하여 만든 inserted plasmid에 각각 제한효소를 처리하는 실험을 했다. 제한효소란 DNA의 특정한 염기서열을 인식하고 인식부위 또는 그 근처의 특정 이중사슬을 절단하는 대표적인 endonuclease로서 재조합 DNA를 만들기 위해 사용된다. 이중사슬의 절단은 nucleotide간의 phosphodiester 결합을 끊어내는 것을 의미한다. 제한효소는 그

DNA가 삽입되었는지 확인Ⅱ. Polymerase Chain ReactionⅠ. DNA sub-cloningⅰ. 첫째 날: 원하는 유전자를 분리 (11.08.월 하성권)Digestion of DNA with Restriction EnzymeSubject여러 과정을 거쳐 Plasmid로부터 inserted DNA를 분리해낸다.PrincipleRestriction enzyme:DNA의 nucleotides를 연결하고 있는 phosphodiester bond를 끊어내거나 붙이는 enzyme.Restriction enzyme의 3가지 종류Type Ⅰ restriction enzymeDNA의 특정부위를 인식하긴 하지만 인식된 부위가 아닌 1000bp가 떨어진 부위를 절단 → 실험목적

DNA 중합 효소가 주형 DNA에서 새로운 DNA를 만들게 된다. PCR은 DNA, RNA 그리고 단백질 수준의 PCR로 나뉠 수 있다. 보통 유전자를 얻는 실험을 할 경우, 그 유전자의 전체를 보려는 것이 아닌 유전자 안에서의 특정 유전자를 관찰하는 것이 목적이다. 하지만 DNA를 바로 PCR하게 되면 특정 유전자를 얻기 힘들고 진핵 생물의 경우, 비발현부위(인트론; Intron)가 같이 나오는 등 여러 가지 문제점이 있다. 그것을 해결하기 위해 특정 유전자에 시발체를 붙인 다음, PC

1. Title : E.coli 에서의 GFP발현 유도2. Purpose : 원하는 유전자(GFP)를 plasmid를 이용하여 bacteria에서 발 현시켜 볼 수 있다.3. Introduction GFP(Green Fluorescent Protein)Bioluminescent jellyfish (해파리) Aequorea victoria는 특징적인 초록 형광을 낸다. 이것은 칼슘-결합 광단백질 (calcium-binding photoprotein)과 green fluorescent protein (GFP)의 두 단백질에 의한 것이다. 최근 10년 동안 GFP는 생화학과 분자 생물학 분야에서 가장 흥미로운 단백질의 하나로 여겨져 왔다. GFP는 발광하는 특