단백질 전기영동과 Western blotting

1. 실험 목표 및 배경지식실험 목표(PURPOSE)-선충의 스트레스에 따른 단백질의 발현정도를 western blotting을 통해 알아본다. 배경지식-Western Blot의 원리Antigen-Antibody reaction을 이용하여 여러 단백질의 혼합물로부터 어떤 특정 단백질을 찾아내는 방법이다. 이러한 Western blot방법은 전기 영동으로 분리한 단백질의 검출을 쉽게 하고 항원 단백질의 검출 및 sterodid-hormone receptor의 검출 등 각종 분석에 이용되고 있다. 첫번째 단계로 분석하

전기가 통하게 하기 위해서)② 아래부분에 기포가 생기는걸 방지하기 위해 기구를 비스듬하게 세우고 (1X) Electro Buffer를 부어준다. ③ marker와 Protein Sample을 well에 loading 한다.(이때 marker는 우리가 전기영동하는 단백질의 대략적인 분자량을 알고 있을 때 어느 정도 위치에 분리되어 있을지를 대략적으로 알려주는 기능을 한다.)④ 분자량에 따라 전압을 걸어주고 Electrophoresis를 시작한다. Ⅱ. Transfer(=Blotting)① gel에 있는 protein을 mem

단백질을 검출할 수 있다. ECL용액은 구입하거나 직접 제조하여 사용할 수도 있다. 1. Solution A (Luminol과 enhancer 포함)와 Solution B (Hydrogen peroxide포함)를 동량으로 섞어준 후 1분간 잘 흔들어 준다. * 8x6cm membrane인 경우에 각 1ml씩이면 충분하다. 2. TTBS에서 membrane을 꺼내 물기를 적당히 제거해 준 후 혼합한 ECL용액에 담그고 1분간 흔들어주면서 고루 적신다.3. Membrane을 꺼내 물기를 적당히 제거한 후 랩으로 싸서 필름카세트에 잘 붙이고 암실로 가서 현상한다

생화학 보고서1. SDS -PAGE2. Western BlotSDS-PAGSDS-PAGE, sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis는 생화학과 유전학 및 분자 생물학에 이용되는 단백질 분리 기술로, 그들의 전기 영동 이동성(polypeptide chain의 길이 또는 분자량 뿐만 아니라 Protein folding, Posttranslational modification과 다른 인자들에 의한)을 이용한 기술이다.1) SDS-PAGE에서 단백질이 분리되는 원리처음 단백질의 solution은 SDS를 첨가한 후에 분석된다. 이 음이온화 detergent는 2차 구조와 non-disulfide b

Western BlottingWestern blot과 면역염색법은 여러 단백질의 혼합물로부터 어떤 특정단백질을 찾기 위해, 찾고자 하는 단백질에 대한 항체를 사용하여 항원-항체 반응을 일으킴으로써 특정단백질의 존재여부를 밝히는 것을 그 목적으로 한다. 여러 단백질을 SDS, urea 또는 2-mercaptoethanol과 같은 환원제로 용해시킨 후 SDS-polyacrylamide gel에 전기영동한 후 Coomassie brilliant blue로 염색하여 전기영동으로 분리된 단백질 대(band)를 확인하거나 nitrocellulose 또는 nylone membrane