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fileicon[생물학실험] 16SrDNA sequencing 을 위한 PCR product의 Vector Cloning

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소개글

[생물학실험] 16SrDNA sequencing 을 위한 PCR product의 Vector Cloning에 대한 자료입니다.

목차

♣ Titl
♣ Introduction
♣ Materials & methods
♣ Results & Discussion
♣ Reference

본문내용

♣ Introduction

우리가 CO에서 자라는 세균을 동정하기 위해 emrichment와 pure culture 를 시켜 얻은 샘플과 metagenome 샘플을 얻었었다. 이 중 우리조는 metagenome 샘플의 PCR를 통해서 CO 세균의 DNA를 확인할 수 있었다. 이렇게해서 얻은 16SeDNA의 sequencing을 위해 업체에 의뢰해야 하지만, 이 상태로 바로 데이터를 전송할 경우, 정확한 결과를 얻기 힘들다. 그 이유는 metagenome을 통해 얻은 DNA 로는 우리가 원하는 CO 환경에서 자라는 세균만을 포함하지 않을 수 있기 때문이다. 즉, 그 안에는 여러 종류의 세균이 있을 수 있음 을 염두에 두어야 한다. 따라서 우리는 16S rDNA의 염기서열 분석을 의뢰하기에 앞서 먼저 우리가 얻은 PCR product 에 대해 하나 하나 product 를 추출해야 한다. 이는 PCR 기법에서 잘 알려진 Vector cloning 으로 이루어진다.


♣ Materials & methods


< 얻은 유전자의 Vector에의 삽입 >

먼저 이때 쓰이는 Vector에 대해 먼저 알아보면, 기능은 다음과 같다.

① 세포 내에서 자가복제 (self-replication)를 함.
② 항생제를 이용한 선택 (selection) 이 가능
③ Multiple cloning site (MCS)를 이용할 수 있음.
④ Vector 부위를 이용한 DNA sequencing, 단백질 발현 등을 할 수 있음.

Vector의 종류

① plasmid
② bacteriophage
③ cosmid
ⓝ phagemid

※ Recombinant DNA
유전자 재조합 기술이란 DNA를 자르고 붙여서 새로운 DNA를 만든다는 말로 자르는 일 은 restriction enzyme이, 붙이는 일은 DNA ligase가 한다.

※ 제한효소 (restriction enzyme)

참고문헌

http://www.naver.com
박상대, “분자생물학” -2판, 라이프사이언스

태그 DNA plasmid, 유전자 ligase, LacZ gene, 재조합 제한효소, beta cell

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