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fileicon[생명공학] DNA 기술 (DNA technology)

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[생명공학] DNA 기술 (DNA technology)에 대한 자료입니다.

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목차

(1) DNA의 분리와 정제

(2) PCR

(3)전기영동

(4) DNA library제조

(6)western blotting

(7) 형질전환 동물

본문내용

(1) DNA의 분리와 정제
1) 세포 내 전체 DNA의 분리 정제
A.세균을 배양하여 수거한다.
a.영양분이 골고루 들어있는 액체 배지를 준비한다.
b.LB배지 또는 복합 배지가 적당하다.
B.세포추출물을 위해 세포를 파괴한다.
a.물리적이나 화학적 방법을 사용하여 세균의 막을 분쇄 시킨다.
b.대장균의 경우에는 세포 벽을 파괴할 때 lysozyme이나 EDTA 또는 이들을 혼합하여 사용한다.
C.세포추출물로부터 DNA를 정제한다.
a.세포추출물은 DNA와 RNA를 포함한다.
b.단백질 제거 buffer로 우선 단백질을 침전 시켜 핵산과 분리시킨다.
c.페놀 혼합액에 넣어 원심분리 한 후 단백질 분해 효소로 처리한다.
D.DNA를 농축 시킨다.
a.농도가 낮은 DNA추출 액은 에탄올 침전 법을 이용하여 농축 시킨다.
b.에탄올 침전은 크기가 작은 핵산과 monomer상태의 핵산구성 성분들이 용액 중에 남게 된다.
2) 플라스미드DNA의 분리 정제
A. 세포 내 DNA분리방법과 비슷하다.
B. 플라스미드에서 세균DNA를 완전히 분리해야 한다.
a. 세균DNA를 분리하는 방법들
-크기에 따라 분리해 낼 수 있다.
-구조적인 차이에 의해 분리해 낼 수 있다.
(2) PCR
1)중합 효소 연쇄 반응이다.
2)특정 DNA로부터 DNA polymerase에 의해 필요한 유전자를 대량 복제할 수 있는 기술이다.
A.과정
a.tagging단계
-증폭될 DNA조각의 말단에 프라이머를 붙힌다.
ㄱ.프라이머
시험관 내 DNA합성과정의 개시 점 이다.
각 뉴클레오티드 서열에 상보적인 올리고 뉴클레오티드들의 짧은 가닥이다.
b.heating
-프라이머를 붙인 DNA들을 약98도로 가열시키는 과정이다.
-이 과정은 이중나선 구조를 단일 가닥으로 해리 시키는 역할을 한다.

태그 DNA, 생명공학, 유전공학, PCR, 전기영동

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