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소개글

[생물학]분자생물학실험에 대한 자료입니다.

하고 싶은 말

^^

목차

Plasmid DNA preparation
Spectrometric measurement of DNA
Restriction Digest
Gel electrophoresis on agarose gel
Set-up DNA ligation (self-ligation)

Preparation of Transformation competent E. coli
Transformation of the recombinant DNA into E. coli cell.

본문내용

Introduction

어떤 생물의 특정한 유전자를 제한효소를 이용하여 잘라서 이 DNA 조각을 세균세포내에 도입하여도 그 유전정보는 발현될 수 없다. 이는 도입된 DNA 단편이 세균세포내의 효소에 의해 분해되거나 그렇지 않으면 세균의 분열과 함께 증식하지 않고 희석되어 소실되기 때문이다.
그러므로 특정 유전자 DNA를 세균세포내에서 증식시키기 위해서 그 DNA 단편을 plasmid라는 기생인자에 삽입하여 cloning을 하여야 한다. 자유롭게 증식할 수 있는 능력을 가진 plasmid의 일부에 목적으로 하는 DNA를 삽입하고 숙주 세균세포에 도입하면 삽입한 DNA는 숙주 세균과 함께 증식하므로 단일의 DNA를 다량으로 얻을 수 있으며, cloning에 이용되는 plasmid를 vector라 한다.
이번 1,2주차 실험에서 우리는 plasmid를 분리해서 recombinant DNA를 만들고 이를 E.coli에 transformation 시키는 과정을 수행하게 되었다.
DNA를 재조합하여 cloning하는 과정은 다음과 같다. 우선 vector가 되는 plasmid DNA를 chromosomal DNA와 분리한 뒤 제한효소로 처리하여 접착성 말단을 갖는 DNA단편을 만든다. 다음에 다른 생물로부터 DNA를 분리, 정제하여 plasmid DNA에 사용한 것과 같은 제한효소로 처리한다. 처리된 두 종류의 DNA 분자들을 함께 섞어 두면 서로 상보적인 접착성 말단끼리 결합하게 되어 DNA 재조합이 일어난다. 염기사이에 수소결합이 형성되면 접착성 말단의 당-인산골격은 DNA ligase에 의해 공유결합으로 서로 연결된다. 이렇게 재조합된 DNA는 세균의 plasmid와 다른 생물의 DNA를 함유하는 잡종 DNA(hybrid DNA)분자가 된다. 이것을 세균세포내에 도입하면 다른 생물의 DNA도 세균과 함께 증식하게 되고 그것이 가지고 있는 유전정보도 발현된다.
이 과정은 이미 유전공학이라는 새로운 생화학 영역을 탄생시켰으며 그 연구결과는 장차 인류의 복지에 크게 공헌할 것이다.

태그 분자, 생물학실험, plasmid, DNA, e.coli

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